產品分類

您的位置◕·:首頁 > 技術文章 > 色譜柱知識分享

技術文章

色譜柱知識分享

時間◕·:2022-09-09 瀏覽次數◕·:453

前言◕·:色譜柱是HPLC系統的心臟☁↟₪。色譜柱的技術從HPLC流行以來有了很大的進步₪✘,分離速度和效能有了提高₪✘,同時穩定性和重現性也提高很明顯☁↟₪。下面以反相色譜柱為例₪✘,介紹一些色譜柱基本知識☁↟₪。

一₪✘·◕、色譜柱填料

下圖為色譜柱的組成

637983273072545126461.jpg

1₪✘·◕、色譜柱載體

大多數用於HPLC分離的柱填料使用矽膠微粒作為擔體₪✘,也有基於多孔聚合物擔體的色譜柱☁↟₪。

下圖所示為HPLC中常見的幾種微粒型別◕·:

全多孔微球因其粒徑₪✘·◕、孔徑和表面積變化較大₪✘,一般情況下效能₪✘·◕、荷載量₪✘·◕、耐久性等都較好₪✘,為我們常用☁↟₪。

矽膠填充微粒

矽膠微粒是我們常用的₪✘,優點是它們的機械強度高₪✘,可保證填充床長時間在很高的操作壓力下工作₪✘,柱效保持穩定☁↟₪。在用於製作HPLC填料的材料中₪✘,矽膠基質色譜柱的柱效*高☁↟₪。

另一個優勢就是他們可以和不同的配合基鍵合(C8₪✘·◕、C18₪✘·◕、苯基和氰基等)☁↟₪。

用於HPLC的矽膠表層都是羥基化的₪✘,稱為水合矽膠(-SiOH)₪✘,水合矽膠分為三種存在型別₪✘,如下圖◕·:

含有自由矽羥基的矽膠因為只有部分羥基化₪✘,酸性很強₪✘,能與鹼性溶質產生強烈的無益結合₪✘,因此₪✘,含自由₪✘·◕、酸性矽羥基濃度高的矽膠基質會使鹼性樣品保留值增加₪✘,峰變寬₪✘·◕、拖尾☁↟₪。見下圖☁↟₪。

有些色譜柱經過封端後能夠降低自由矽羥基₪✘,減少對鹼性樣品的影響☁↟₪。見下圖2.色譜柱固定相

2.1.鍵合固定相

矽膠基質的反相填料一般透過在擔體表面上共價鍵合有機矽烷或沉積聚合物有機塗層☁↟₪。 

2.2₪✘·◕、鍵合固定相的形式◕·:許多鍵合相填料都是用單官能團試劑製得₪✘,也有些商品填料是用三官能團(有時也用雙官能團)矽烷與矽膠表面反應形成的交聯聚合表層☁↟₪。見下圖☁↟₪。

3₪✘·◕、鍵合的型別

圖所示為填料與官能團共價鍵合的各種型別☁↟₪。圖a所示為用雙或三官能團矽烷反應的輕度縱向交聯相₪✘,由這些反應得到的鍵合相₪✘,在低pH時₪✘,比單體相的非交聯固定相更穩定₪✘,但與用單官能鍵合相比較₪✘,用此方式製得的填料柱間的保留值與選擇性不太穩定☁↟₪。圖b所示為另一型別的鍵合矽烷的表面₪✘,稱作橫向交聯₪✘,這些填料在低pH與高pH環境中均非常穩定☁↟₪。如圖c和d所示₪✘,是非交聯型的柱填料₪✘,通常透過單官能團二甲基氯矽烷與表面矽經基反應得到₪✘,存在二甲基取代及位阻保護結構兩種₪✘,如◕·:正一十八烷基矽烷ODS或C18鍵合相材料₪✘,單官能團矽烷反應的優點是重現性好₪✘,一個矽烷基與一個矽烷分子反應₪✘,產生可預測的結構₪✘,而且製得的填料柱效較高₪✘,因為溶質分子在薄固定相層內的擴散迅速☁↟₪。

一般情況下₪✘,由於鍵合相配位體的空間位阻效應₪✘,矽膠基質表面的矽羥基不能*參加反應₪✘,隨著鏈長或矽烷體積的增大₪✘,參加反應的矽經基比例相應減小₪✘,這些未反應的矽羥基能在分離離子樣品₪✘,特別是鹼性樣品的時候透過離子交換作用導致保留值增加₪✘,譜峰拖尾₪✘,柱間重複性差☁↟₪。

二₪✘·◕、色譜柱各個引數意義

孔徑是粒徑是矽膠球的直徑₪✘,孔徑是指矽膠球上小孔的直徑☁↟₪。但這個小孔是不穿過球體的₪✘,只是球上凹進去的一塊☁↟₪。可以簡單想成高爾夫球的樣子☁↟₪。樣品分子進入這個小孔₪✘,在小孔內被鍵合的烷基吸附₪✘,然後出來有快有慢₪✘,達到分離的目的☁↟₪。

孔徑小₪✘,含孔率高₪✘,則比表面積大₪✘,載碳量高„ 化合物在孔內分離„ 孔徑大小必須和分子大小相匹配₪✘,分子必須能進入孔內₪✘,一般小分子使用80-120A₪✘, 大分子通常使用300A☁↟₪。為了達到最佳分離,一般要求孔徑直徑是分子直徑的3倍以上☁↟₪。

 

線上客服
返回頂部
久久久精品人妻一区二区三区,国产精品久久久久精品亚瑟,天天躁日日躁狠狠躁日日躁黑人,么公在浴室征服了小雪小说